本文標(biāo)題："微生物多態(tài)激光檢測儀分析圖像顯微鏡"
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微生物多態(tài)激光檢測儀分析圖像顯微鏡
另一種解析從DNA提取物擴(kuò)增出的混合16S rDNA的方法是變性梯度
膠電泳(DGGE)，可以將同樣長度僅有一兩個核苷酸差異的片段分離開。
接著用rDNA與已知生物的寡核苷酸探針在電泳條帶上以雜交的方式來鑒
定與探針成功雜交的相應(yīng)生物。如果需要純化，電泳膠的條帶可以經(jīng)洗
脫，再擴(kuò)增，確定他們的核苷酸序列。這些序列接下來可以到對應(yīng)的數(shù)
據(jù)庫進(jìn)行序列比對來確定是否曾被報道。第二個主要的微生物指紋圖譜
技術(shù)是末端限制性片段長度多態(tài)。t—RFLP通過限制性酶識別序列，它
根據(jù)特異性限制位點分解DNA分子。得到的片段按大小分開。單個片段
的分離是由于PCR引物中的一個帶有熒光標(biāo)記，當(dāng)接近這個引物的片段
遷移經(jīng)過激光檢測儀時就檢測到DNA序列。雖然這是一種比較不同模版
的多態(tài)性的簡便方法，但t—RFLP對于正確分析多態(tài)性差異還比較繁瑣
。另外，DNA微陣列將被用于一個環(huán)境樣本中微生物多樣性的快速評估
這種以16S rRNA為基礎(chǔ)的微生物多態(tài)性評估方法的重要前提是16S
rRNA基因存在于片段中，并且有時呈多態(tài)和單基因拷貝(Klappenbach等
，2001)。其他可能影響以PCR一為基礎(chǔ)的16S精確評價的因素包括，潛
在的基于膜分化耐受性產(chǎn)生的細(xì)胞裂解能力的不同對核苷酸擴(kuò)增的影響
；細(xì)胞顆粒吸附或包埋在復(fù)合培養(yǎng)基中使其無法收集；共提取的污染物
可能妨礙下游程序，DNA剪切導(dǎo)致嵌合產(chǎn)物，
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